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1、初染：用装片夹夹紧抗酸染色标本采集，滴加石炭酸复红2-3滴，在火苗高空缓缓加温，切忌烧开，出现蒸气即临时离去，若染色液挥发降低，应加上染色液，以防干枯，加温3-5分钟，待标本采集制冷后自来水清洗。

2、2、褪色：3%盐酸乙醇褪色30秒~1分钟；自来水清洗。

3、3、复染：用偏碱美兰水溶液复染1分钟，水清洗，用吸水海绵吸走后用食油镜观查。

4、抗酸染色的原理分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。

5、但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。

6、齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。

7、当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。

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